tet抗性铜绿假单胞菌接合转移phn102方法研究

摘要二亲本杂交实验通常要求受体菌不能携带有与质粒上相同的抗性.本次实验中受体菌铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa)和重组质粒phn102都带有四环素(tc)抗性.考虑到质粒phn102导入受体菌后至少带有两个tc抗性基因片段，转移接合子的抗性会增强，所以提高四环素浓度至20μg/ml，并利用phn102上携带的luxab发光酶基因标记受体菌筛选转移接合子，并设立对照菌株.通过抽提质粒、琼脂糖凝胶电泳检测，确定phn102成功转入p.aeruginosa中.转移接合子经4次转接后，质粒仍可以稳定存在且能够稳定表达.p.aeruginosa(phn102)的发光动力学曲线表明，加入底物20min后，发光强度趋于稳定.经液体培养稀释后进行发光度和活菌数测定，发现二者呈显著的线性关系(r=0.994).图4表2参6