费氏中华根瘤菌lrp基因的克隆、突变与功能*

通过分子克隆技术，从费氏中华根瘤菌(sinorhizobiumfredii)hn01基因组文库中克隆到一个lrp基因.该基因与已报道的苜蓿中华根瘤菌(sinorhizobiummeliloti)1021的lrp基因在核苷酸水平上有89%相似性，在氨基酸水平上有99%相似性.利用自杀质粒pk18mob构建含有lrp基因部分片段的重组质粒，通过三亲本结合后导入原始菌株hn01中，经过同源单交换，获得发生正向插入突变的突变株gxhnlta和反向插入突变的突变株gxhnltb.将lrp基因orf连接到载体plafr3上，获得用于互补的质粒pgxhnl100，将该质粒通过三亲本接合导入突变株中，获得互补株gxhnwa、gxhnwb.对野生型菌株、突变株、互补株进一步研究发现，在以脯氨酸、亮氨酸、丝氨酸等氨基酸为唯一碳、氮源的mm培养基中培养时，突变体gxhnlta、gxhnltb的生长均滞后于出发菌株hn01.植株试验表明，突变菌株gxhnlta、gxhnlb比野生菌株hn01开始结瘤的时间提前1d，在结瘤效率、单株瘤数、瘤重、固氮酶活性方面并无显著差别.图4表3参16