碱性果胶酯裂解酶基因工程菌pichiapastoris诱导表达条件初步优化

在摇瓶水平上，采用单因素试验方法，对影响碱性果胶酯基因工程菌pichiapastoris表达的主要因素进行研究，确定初始甲醇浓度、甲醇补加量和氮源酵母氮基(ynb)浓度3个主要影响因素的初步优化结果为5%、0.8%和1.3%.在此基础上，利用响应面分析法进一步优化.经优化，表达条件为初始甲醇浓度4.35%、甲醇补加量0.75%以及ynb浓度1.31%，优化后碱性果胶酯裂解酶(pl)表达量达到40.6u/ml，较初始培养条件提高约2.3倍.同时，利用sds-page电泳对优化前后基因工程菌表达情况进行分析，结果同样表明胞外目标蛋白pl表达量有明显增加，进一步证实条件优化后对目标蛋白pl分泌表达具有十分明显的促进作用.图4表5参18