假单胞菌表达载体pymb03的构建与性能分析

恶臭假单胞菌(pseudomonasputida)是具有强抗逆性能的环境优势菌，构建其质粒表达载体有着明显的应用潜力.将恶臭假单胞菌ab92019菌株中肽聚糖相关脂蛋白编码基因的启动子poprl和质粒载体ptrchis？b的多克隆位点片段插入到质粒载体pucp18的ecori/hindiii位点，获得了重组载体pymb03.用绿色荧光基因gfp作为标记进行外源蛋白表达的结果表明，该载体能分别在恶臭假单胞菌ab92019菌株和大肠杆菌dh5a菌株中，由启动子poprl启动组成型表达gfp蛋白并使细胞产生可见荧光.经sds？page验证，所产生的gfp蛋白分别占细胞总蛋白的12.5%和5.0%.重组菌株ymb001中gfp表达量与菌体培养时间有关，在稳定期后期其相对荧光强度达到最大值(d600nm＝1.0)，但与培养温度未见相关性.对携带该载体的2株重组恶臭假单胞菌7次168h继代培养测定，载体pymb03的稳定性均为100%.图7表1参17