重组植酸酶appam8的异源表达与性质比较

为比较在不同宿主中表达的大肠杆菌植酸酶突变体appam8的性质，将appam8基因分别在大肠杆菌bl21(de3)和毕赤酵母gs115中进行表达，对纯化后的植酸酶进行酶学性质分析与比较.结果显示：（1）在大肠杆菌中表达的appam8（e-appam8）和酵母中表达的appam8（p-appam8）的最适ph值均为4.5，最适反应温度均为65℃，与野生型的appa的最适ph无明显区别，比appa的最适温度高了5℃；（2）经sds-page检测，e-appam8分子量（mr）大小为47×103，而p-appam8为53×103左右，由于在酵母中的糖基化修饰电泳显示为两条带；(3）在60-80℃之间，e-appam8的热稳定性性明显下降，而且在70℃处理15min后，e-appam8残余活性仅为4%，而p-appam8仍保留50%的残余活性，表明酵母表达的植酸酶经过糖基化修饰后提高了酶的热稳定性.（4）e-appam8的km=0.245mmol/l，vmax=3196u/mg，p-appam8的km=0.36mmol/l，vmax=3333u/mg.本研究表明，糖基化修饰对植酸酶appam8的热稳定性起着重要作用，8个位点的突变对该植酸酶的稳定性也起到了一定作用.