大肠杆菌磷酸果糖激酶基因在氧化硫硫杆菌tt-7中的表达应

摘要专性自养极端嗜酸性氧化硫硫杆菌缺乏emp、ed途径以及三羧酸循环的关键酶（如磷酸果糖激酶等），不能氧化有机物获得能量.本文利用pcr技术扩增e.colik？12磷酸果糖激酶？1基因（pfka），将该基因与广泛寄主的incq质粒pjrd215连接构建重组质粒psdk？1，该质粒可与pfk基因缺陷株e.colidf1010互补.通过接合转移的方式将其导入氧化硫硫杆菌tt？7中并得到表达.psdk？1在宿主tt？7中有较好的稳定性，在无选择压力条件下连续传50代仍可保留75%.酶活性测定表明，psdk？1的pfka基因在缺陷株e.colidf1010中表达水平〔（96.6±0.66)u/g蛋白〕略高于原始菌株e.colik？12〔(85.9±1.12)u/g蛋白〕；而在氧化硫硫杆菌中则以较低水平进行表达〔（12.4±0.73)u/g蛋白〕，并且其表达水平不受培养基中葡萄糖的影响.实验表明，在无机盐培养基中加入葡萄糖时，含质粒psdk？1的氧化硫硫杆菌tt？7可利用培养基中的葡萄糖而加快生长，而对照菌株的生长则未受明显影响；但是重组菌利用葡萄糖的速度较缓慢.图5表2参16