豆豉溶栓酶基因在毕赤酵母中的表达及其产物的纯化

摘要将含有和不含前肽的豆豉溶栓酶编码序列在毕赤酵母中分别进行表达研究，发现在含有前肽的豆豉溶栓酶基因转化的毕赤酵母工程菌用甲醇诱导时，其培养液中可检测到较强的溶栓酶活性；而在不含前肽的豆豉溶栓酶基因转化的毕赤酵母菌用甲醇诱导时，培养液中未检测到溶栓酶活性.对毕赤酵母表达和分泌的豆豉溶栓酶进行了分离纯化，并对其纯化产物进行溶栓酶活性、sds-page电泳、抑制剂作用及免疫印迹分析.结果表明，分泌到培养液中的豆豉溶栓酶已经过剪切加工，其前肽已被切除，重组与天然的豆豉溶栓酶具有相同的溶栓酶活性，其所测定的各理化指标均一致.本研究实现了豆豉溶栓酶在毕赤酵母菌中成功表达，并首次直接证明了前肽对豆豉溶栓酶在毕赤酵母中分泌表达是必须的.图3表1参20