乳酸片球菌l-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要与其它微生物相比，用大肠杆菌进行发酵生产乳酸有许多优势，但大肠杆菌没有l？乳酸脱氢酶基因，不能利用糖发酵生产l？乳酸.本文采用pcr技术，以乳酸片球菌(pediococcusacidilactici)基因组dna为模板，克隆得到l？乳酸脱氢酶(l？lactatedehydrogenase)基因，将该基因的orf连接到表达质粒pet？22b(+)，获得重组质粒pet？ldhl.将pet？ldhl质粒转化大肠杆菌bl21株，实现了ldhl基因的表达；对含有ldhl基因的重组菌株进行表达研究，在30℃以iptg诱导8h后，sds？page分析可见明显特异性条带，酶活力达到6.49u/ml，是野生菌酶活力(2.82u/ml)的2.3倍.对重组表达的l？乳酸脱氢酶生物学特性研究显示，它们的最适反应温度为27～30℃，最适反应ph为5.0～5.3.图5参15