麻疯树胚乳类f-盒蛋白基因的克隆和载体构建

摘要通过随机测序从本实验室构建的麻疯树胚乳cdna文库中获得了一条与多种植物、动物f？盒家族(f？box)序列相似的est序列，并进一步克隆得到含有完整编码框的cdna全长和基因组序列(jc？fbl1).jc？fbl1cdna全长1672bp，开放阅读框为1224bp，编码的蛋白质含有407个氨基酸残基.jc？fbl1推导的氨基酸序列与拟南芥、水稻中的同源f？box蛋白相似性分别为52%和75%；与人、斑马鱼、线虫等动物的f？box蛋白的相似性达到48%~56%.应用pfamsearch寻找功能结构域，发现其除了含有f-盒家族类结构域外，还有富含亮氨酸重复单位(leucine？richrepeats,lrrs).比对jc？fbl1的基因组序列和cdna序列，发现jc？fbl1有两个长度分别为331bp和893bp的外显子和一个长362bp的插入序列，符合内含子的gt？ag法则，认为是jc？fbl1的内含子.水稻、拟南芥基因组中的同源序列也出现了这种两个外显子、一个内含子的结构，且内含子位置较为保守.为了进一步研究麻疯树f？box蛋白的功能，构建了同时含有jc？fbl1完整开放阅读框序列和绿色荧光蛋白标签的真核表达载体pbi121？jc？fbl1？gfp，并经酶切鉴定构建成功.图4参19