重组人核糖核酸酶抑制因子基因的sirna表达载体构建及b16细胞中基因沉默的鉴定

摘要人核糖核酸酶抑制因子(humanribonucleaseinhibitor,hri)是细胞质中的一种酸性糖蛋白，可以与血管生长因子(angiogenin,ang)紧密结合从而抑制血管形成.利用全基因组合成法合成针对人核糖核酸酶抑制因子基因(hri)的发夹shrna序列，亚克隆到sirna表达载体pkd；重组载体经酶切鉴定后，用脂质体法与报告基因绿色荧光蛋白重组融合的人核糖核酸酶抑制因子的逆转录病毒载体plncx？egfp？c1？hri共转染到小鼠黑色素瘤细胞b16中，在荧光显微镜下检测干扰效果.用image？proplus4.5软件对绿色荧光照片半定量分析干扰效率.结果表明，荧光显微镜显示b16中表达的绿色荧光被干扰，荧光强度半定量分析干扰效率可达80%以上.成功重组构建了针对hri的sirna表达载体.图5参9