厌氧梭菌表达载体在大肠杆菌中的直接表达及活性筛选

厌氧微生物的代谢途径改造、重组基因表达等分子生物学操作步骤多，易造成氧气接触，从而导致厌氧微生物死亡.针对厌氧梭菌-大肠杆菌穿梭载体的构建和筛选问题，利用纤维素内切酶基因cphy3367作为报告基因，分析穿梭载体的硫解酶启动子在大肠杆菌中启动基因转录表达的可能性.含有重组质粒psos95-cphy3367的大肠杆菌菌株相对于对照菌株生长迟缓，生物量降低.实时定量pcr检测及重组蛋白酶活检测结果中，发现硫解酶启动子在大肠杆菌中能启动基因转录表达，在37℃温度下48h后达到高峰.表明硫解酶启动子在大肠杆菌中可以被宿主识别和启动基因表达，基因可以翻译成为蛋白质.在厌氧梭菌的穿梭载体构建中，含有硫解酶启动子的载体可以在大肠杆菌中进行重组载体的活性筛选这个步骤，从而降低梭菌厌氧操作的复杂度和难度.图4表1参24