牛肠激酶催化亚基cdna的克隆及融合表达载体的构建

肠激酶(enterokinase,ek)是目前生物制药领域纯化重组蛋白产品时用于切割融合蛋白的首选工具酶之一.为克隆表达牛肠激酶催化亚基(ekl)编码的基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化,从市售肉牛十二指肠组织中提取总rna,以rtpcr方法扩增其cdna片段,将此片段克隆于pucmt载体中进行全序列分析.结果表明克隆的cdna与genbank上的序列相比完全一致.随后,将目的基因片段插入pet32a融合型表达载体中.经测序证实其重组dna5’端多克隆位点与重组片段的接口处核苷酸顺序准确无误,所表达重组蛋白经sdspage分析,相对分子质量为50kd,表达量达38%,为进一步进行enterokinase催化亚基蛋白表达及活性研究奠定了基础.