甲状旁腺素非plc依赖pkc通路激活增强成骨细胞cited1表达

目的通过相关信号通路屏蔽和基因表达分析，探讨甲状旁腺素（pth）非plc依赖pkc信号转导途径（pth/nonplc/pkc）的功能，分析其对骨代谢的影响。方法取2~3dc57bl乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞，取贴壁生长的第1代细胞，随机分为4组：100nmol/l［gly1,arg19］hpth（1-28）（简称gr（1-28））+10nmol/lrp-camp；10nmol/l［gly1,arg19］hpth（1-34）（简称gr（1-34））+10nmol/lrp-camp；10nmol/lpth（1-34）及空白对照组加入等体积的0.1%三氟乙酸（trifluoroaceticacid,tfa），作用4h后，提取各组总rna，行小鼠全基因组表达谱芯片分析，筛选出可能与nonplc/pkc信号转导通路相关的差异表达基因，并进行相关通路分析。rt-pcr筛选及验证上述差异表达基因。培养mc3t3-e1细胞，分为4组：gr（1-28）+rp-camp；gr（1-34）+rp-camp；gr（1-34）+rp-camp+100nmol/lgo6983及空白对照组，rt-pcr法验证比较gr（1-28）和gr（1-34）引起的基因表达变化情况。结果倒置相差显微镜观察示，培养7d见细胞排列紧密，为三角形或多边形，呈铺路石样；细胞培养14dalp染色可见胞质中出现蓝染颗粒，成骨诱导培养28d茜素红染色可见红色矿化结节形成。基因芯片分析结果中筛选出与pth的nonplc/pkc信号转导通路相关性最大的56个基因，进行rt-pcr验证后发现cited1的表达量在gr（1-34）+rp-camp组显著高于gr（1-28）+rp-camp组及空白对照组，但小于pth（1-34）组（p<0.05）。mc3t3-e1细胞rt-pcr验证的结果与其一致，在阻断camp/pka信号通路后，仅cited1基因表达量在gr（1-28）和gr（1-34）刺激时存在显著不同，且加入pkc抑制剂（go6983）后，表达差异消失。结论pth的nonplc/pkc信号转导通路的激活能够使得成骨细胞cited1的表达量明显升高，介导pth对成骨代谢的作用。该途径不依赖plc和pka信号的激活。