cd44在新生隐球菌体外感染血脑屏障中对单核细胞迁移的影响

目的新生隐球菌（cryptococcusneoformans,cn）荚膜主要毒力因子透明质酸由cps1基因编码，能与宿主细胞受体cd44结合介导真菌侵袭。本文目的明确cd44分子在cn体外感染血脑屏障模型中对单核细胞黏附人脑微血管内皮细胞（hbmec）并迁移穿越血脑屏障的影响。方法用单层hbmec铺趋化小槽构建体外血脑屏障模型，利用cn野生株b4500fo2、cps1基因缺失株tycc645#32和cps1基因回补株pcip，分别感染模型中的hbmec，然后在上槽液中加入人白血病单核细胞（thp-1），计数从上槽液中迁移到下槽液中的单核细胞数量，观察cn感染与单核细胞迁移时间和剂量关系；用抗cd44单克隆抗体和cd44抑制剂bikunin分别作用于模型中单层hbmec，通过趋化实验检查抗cd44单克隆抗体和bikunin对cn感染模型中单核细胞迁移的抑制效应。结果黏附和趋化实验结果显示，cn感染hbmec后，相比pbs对照组，thp-1黏附率和趋化效应均明显增加（p<0.01），且黏附率和迁移率随cn感染量和感染时间的增加而显著上升（p<0.05）。通过抗cd44单克隆抗体和cd44阻断剂bikunin分别作用于cn感染后的hbmec，结果发现thp-1黏附率和迁移率均显著降低（p<0.01），且在一定范围内分别随抗体（0~1μg）和抑制剂（0~20nmol/l）剂量的增加而减低。不同cn菌株荚膜透明质酸的表达差异对thp-1细胞黏附和迁移有一定影响：与野生株相比，tycc645#32感染组的thp-1黏附率和迁移率均明显降低（p<0.01，p<0.05），而回补株pcip的thp-1黏附率和迁移率有所增加。结论体外血脑屏障模型中人脑微血管细胞表达cd44分子可能对单核细胞黏附内皮细胞和迁移通过血脑屏障起重要作用；荚膜透明质酸能介导cn诱导的单核细胞黏附和迁移。