应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cdna文库

目的构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cdna文库。方法采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cdna片段,将其与t载体进行t／a连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取100个白色克隆用菌落．pcr进行鉴定。结果扩增消减cdna文库获得3000余个白色阳性克隆,随机挑取100个白色克隆用pcr进行扩增,90％的克隆中均有200-600bp的插入片段,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cdna片段。结论用ssh法及t／a克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cdna文库．该消减cdna文库的建立为进一步筛选、克隆哮喘病人嗜酸细胞差异表达的新基因奠定了基础。更多还原