脱氧核酶对端粒酶rna的切割和乳腺癌细胞凋亡相关基因表达的作用

目的探讨脱氧核酶对端粒酶rna组分(htr)的切割作用及对人乳腺癌细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达的影响。方法针对htr基因的核苷酸序列,合成“10~23”型脱氧核酶及其类似物,提取总rna在体外切割htrrna;转染乳腺细胞后,用rt-pcr扩增htr基因片段,用pcr-elisa法测定端粒酶活性,用rt-pcr和荧光免疫测定凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果未经修饰的脱氧核酶dzt和在dzt的3’末段添加倒位连接t碱基的脱氧核酶dzti在体外能够有效地切割htrrna;在转染乳腺癌细胞后,dzti比dzt对htrrna表现出更强的切割作用,dzti能够显著地降低乳腺癌细胞端粒酶活性(p<0.05),但对乳腺癌细胞的生长和细胞凋亡相关基因bcl-2和bax基因没有明显的影响(p>0.05)。dzt和dzti的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸dzt’和dzti’在胞外和胞内均不表现对htrrna的切割作用。结论人工合成的脱氧核酶确实能够高效特异地切割端粒酶htrrna,并降低乳腺癌细胞的端粒酶活性。作为一种新发现的催化性核酸,脱氧核酶在肿瘤的基因治疗领域中可能具有极其重要的应用价值。