小鼠tlr-2n末端基因的克隆表达和抗体制备

目的克隆mtlr-2基因氨基端序列,并表达和纯化n端融合蛋白,制备抗mtlr-2n末端的多克隆抗体。方法采用pcr技术扩增编码mtlr-2n端1～153氨基酸的基因,并将其克隆到pet32a载体中,测序验证;用大肠杆菌表达融合蛋白,并以probond树脂柱纯化;免疫家兔制备多克隆抗体,采用免疫组化、流式细胞术及间接elisa检测抗体特异性及效价。结果成功构建了融合表达载体pet-n,表达和纯化了相应的融合蛋白,所制备多克隆抗体可与pgex-n表达的融合蛋白反应,并可结合表达tlr-2的raw264.7及转染mtlr-2全长基因的cho细胞。结论获得了mtlr-2n末端重组融合蛋白及其可与天然mtlr-2结合的多克隆抗体。