her2/neu膜外及跨膜区蛋白基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的构建编码her2/neu膜外第一受体区、全长膜外区、膜外及跨膜区3个蛋白的重组腺病毒真核表达载体,为信号传导和免疫研究建立实验材料。方法rt-pcr扩增出3个目的片段的cdna,克隆进padtrack-cmv穿梭质粒,在bj5183细菌内同源重组形成腺病毒质粒,脂质体法转染293细胞后,荧光显微镜观察病毒噬斑形成和绿色荧光蛋白表达,westernblot检测目的蛋白的表达。结果pcr扩增出了预定大小的目的基因cdna片段,测序结果和genbank完全相符。病毒质粒转染293细胞后形成了病毒噬斑,绿色荧光蛋白和目的蛋白均获得表达。目的蛋白的表达量随着病毒感染复数的升高而增加。结论成功地构建了在真核细胞中表达her2/neu膜外及跨膜区蛋白的腺病毒载体,为her2/neu膜外及跨膜区蛋白的功能研究提供了材料基础。?