ip-10重组腺病毒载体的构建及其病毒制备

目的利用细菌内同源重组法构建带有增强型绿色荧光蛋白(egfp)标签的!-干扰素诱导蛋白10(ip-10)重组腺病毒载体并制备重组腺病毒。方法将ip-10编码序列克隆入带有egfp示踪的腺病毒穿梭质粒padtrack-cmv中,形成转移载体padtrack-cmv/ip-10,将其在大肠杆菌bj5183内与腺病毒骨架质粒padeasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pad/ip-10;酶切鉴定正确后转染hek293细胞。收集病毒上清,pcr鉴定正确后,扩增并再次感染hek293细胞检测病毒感染能力。结果重组质粒经酶切、pcr和测序鉴定正确无误,并在hek293细胞中包装成有感染活性的病毒颗粒。结论成功地构建了表达ip-10蛋白的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒ad/ip-10,为研究ip-10的蛋白功能提供了一个重要工具。?