微孔杂交检测登革病毒及其分型方法的建立

目的建立特异、敏感、实用的登革病毒检测及分型方法。方法分析登革1￣4型病毒基因组序列,分别设计针对登革病毒1￣4型的特异性包被探针,扩增、克隆测序后包被聚乙烯微孔板。pcr上游引物5’端标记生物素,对待检样品进行扩增后用作检测探针进行微孔杂交(pcr-elisa)反应,并通过设定不同的包被dna浓度、包被时间、杂交温度、杂交时间,对pcr-elisa反应进行优化。结果建立了快速、特异、敏感的登革病毒快速检测及分型方法,试验结果直观,阳性标本吸光度值在0.5以上,阴性结果吸光度值在0.1以下,s/n值在10以上。结论所建立的方法可用作登革病毒感染的早期诊断及分型。?