重组人tff2乳酸链球菌表达载体ptrtff2的构建

目的构建带c-myc分子标签的人三叶因子家族2(htff2)融合基因c-myc-htff2的乳酸链球菌表达载体,以便进一步构建能表达活性c-myc-htff2融合蛋白的乳酸链球菌工程菌。方法根据htff2的氨基酸表达序列和乳酸链球菌的氨基酸密码子,以c-myc作为分子标签,设计c-myc-htff2的cdna序列,并在其5’端和3’端添加sali和bamhi酶切位点;将目的基因片段设计成14个相互互补的寡核苷酸,经聚合酶链式反应,得到目的基因c-myc-htff2;将c-myc-htff2连入pbluescriptiisk(+)载体,构建其克隆载体pbs-tff2并进行酶切鉴定及dna测序;分别用sali/bamhi和xhoi/bamhi对pbs-tff2和pnbc1000进行双酶切反应,再通过连接反应将c-myc-htff2融合基因插入pnbc1000,构建c-myc-htff2大肠杆菌表达载体(pntff2);用xbai对pntff2和穿梭载体ptrkh2单酶切反应,并通过连接反应将c-my-htff2的表达载体连入穿梭载体ptrkh2,完成乳酸链球菌表达载体ptrtff2的构建,并进行酶切鉴定。结果成功构建了c-myc-htff2的乳酸链球菌表达载体ptrtff2。结论体外基因拼装是构建目的基因有效的方法;ptrtff2的构建为构建乳酸链球菌工程菌奠定了基础。