血管内皮生长因子在原核细胞中的高效表达、纯化与活性研究(英文)

目的用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子(vegf165),分离纯化并检测其免疫学以及生物学活性,为后期构建携带vegf165蛋白的预成血管化组织工程骨提供充足的蛋白来源。方法利用pcr亚克隆的方法获得目的基因片段,构建表达质粒pqe30-vegf165,在大肠杆菌jm109中用iptg进行诱导表达并使用ni2+-nta进行蛋白纯化。酶联免疫吸附(elisa)和westernblot技术检测纯化的vegf165蛋白免疫学活性,鸡胚尿囊绒毛膜实验和matrigel血管形成实验检测其生物学活性。结果重组表达质粒pqe30-vegf165在大肠杆菌中成功的表达了相对分子质量为23000的蛋白,该蛋白以不溶性包涵体的形式存在,占菌体总蛋白的30%左右。经过分离和ni柱纯化获得了vegf165蛋白,浓度约为0.2mg/ml,elisa和westernblot实验显示其具有良好的免疫学活性,鸡胚尿囊绒毛膜实验和matrigel血管形成实验显示所表达的蛋白具有良好的生物学活性。结论本实验在原核细胞中稳定、高效的表达了具有活性的vegf165蛋白,为后期预购血管化组织工程骨的构建提供了充足的蛋白来源。