蛋白激酶d1在烟曲霉介导的nf-κb信号通路激活及转录活性中的作用

目的研究蛋白激酶d1（pkd1）在烟曲霉介导的nf-κb信号通路激活及转录活性中的作用，为进一步探讨pkd1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将gfp、gfp-pkd1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞a549和hek293细胞中，分别将灭活的烟曲霉分生孢子（1×105cfu/ml）于不同时间处理上述两组细胞，westernblotting证实pkd1的过表达，并检测pkd1的磷酸化活性；其次在a549细胞中分别转染gfp-pkd1、sirna-pkd1并以灭活的烟曲霉分生孢子处理细胞30min，分别检测下游nf-κb通路相关信号分子的磷酸化活性；最后，将nf-κb-luc荧光素酶报告基因及内参照报告质粒海肾荧光素酶（prl-sv40）共转染入表达gfp、gfp-pkd1的a549细胞中，两组细胞在有无烟曲霉分生孢子的作用下处理24h，收集细胞裂解液，进行双色荧光素酶活性检测。结果westernblotting证实pkd1的过表达时间依赖性地增强烟曲霉刺激的a549细胞和hek293细胞中pkd1的磷酸化活性及nf-κb通路中iкb和p65（ps276）的磷酸化活性，反之，敲低pkd1的表达则抑制烟曲霉介导的nf-κb通路中iкb和p65（ps276）的磷酸化活性。过表达pkd1明显增加nf-κb-luc荧光素酶的转录激活活性。结论pkd1可能在烟曲霉刺激的nf-κb通路的激活及转录活性中起重要作用。