cited163-84氨基酸片段是影响其细胞定位与成骨作用的关键区域

目的生物信息学分析发现cited163-84氨基酸片段为其重要的功能片段，进一步研究cited163-84氨基酸片段突变(丝氨酸突变为丙氨酸）是否影响其进核及成骨分化，探讨其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法cited163-84突变质粒（9s>a），cited1质粒及空白质粒分别转染mc3t3-e1细胞，培养2d，用100nmol/lpth（1-34）刺激细胞，行细胞免疫荧光实验，共聚焦镜下观察细胞内cited1位置变化。将cited163-84突变质粒（9s>a），cited1质粒及空白质粒按相应体系转染mc3t3-e1细胞，分为两组，一组成骨诱导4周，另一组成骨诱导基础上进行10nmol/lpth（1-34）间歇刺激（每48h刺激4h）4周，测alp酶活性及ca离子浓度并进行alp及茜素红染色。行rt-pcr实验分析成骨相关基因alp2，runx2，oc的表达量。结果pth（1-34）可促进cited1进核，将cited1氨基酸63-84片段突变后，可明显抑制该反应。4周成骨诱导后，cited1过表达明显抑制成骨细胞分化，alp及ca离子浓度明显低于对照组，而cited1突变质粒（9s>a）过表达alp及ca离子浓度明显高于cited1组，与对照组基本相同。进一步研究表明，cited1过表达抑制pth（1-34）诱导的成骨细胞分化，而cited1突变质粒（9s>a）可逆转该反应。alp染色及茜素红染色也验证了以上结论。rt-pcr结果提示：cited1突变质粒（9s>a）过表达成骨相关基因alp2，runx2，oc明显高于cited1质粒过表达。结论cited163-84片段丝氨酸为其重要的功能位点，可影响其细胞进核及成骨分化。