人cd45基因克隆及其在hela细胞中的表达

目的克隆人cd45cdna并导入hela细胞中表达，建立研究cd45功能的细胞模型。方法采用rt-pcr方法从人外周血单个核细胞中扩增cd45基因ptprc的cdna，将其克隆至pmd-18t载体。构建重组真核表达载体pcdna3.1-3xflag-cd45，经hindⅲ和xhoⅰ双酶切及测序验证。将其转染至hela细胞，以流式细胞术（fcm）和免疫印迹（wb）分析cd45在hela细胞中的表达情况，碱性磷酸酶试剂盒检测cd45的活性。结果分离到长约3900bp的人ptprccdna片段，将其插入pmd-18t载体获得了cdna克隆。酶切和测序结果证实重组表达载体pcdna3.1-3xflag-cd45构建成功，fcm和wb分析表明cd45能在hela细胞中有效表达，且表达的重组cd45蛋白具有生物学活性。结论成功获得人ptprccdna克隆并在hela细胞中有效表达，为进一步研究cd45功能奠定了基础。