健康成人24h尿液细胞外囊泡定量及大小分布

目的研究观察健康成人24h尿液细胞外囊泡（uevs）数量、大小分布及个体间差异。方法利用液压透析滤过法分离9名健康成年人24huevs，通过westernblot（wb）和透射电镜（tem）技术验证uevs的分离效果，应用bca蛋白定量法及纳米微粒跟踪分析技术分别对富集的uevs样品进行蛋白定量测定和囊泡数量及大小分布的分析。结果tem下可见大小不等、形状不一的囊泡。wb技术检测到外泌体的标记物―人肿瘤易感基因（tsg101）。9名健康成人24h尿液分离的uevs样品蛋白定量范围为132.50~760.70ng/ml。纳米微粒跟踪分析技术检测结果显示24huevs数量为（3.56~5.12）×1012个，cv=14.23%。24h分泌的uevs中，直径在<40nm范围内的囊泡占所检测到的总囊泡数的0.04~0.69%，数量为（1.80~26.49）×109个；符合外泌体直径范围（40~100nm）的囊泡占总囊泡数的22.07%~42.08%，数量为（1.00~1.77）×1012个。符合微囊泡直径范围（100~1000nm）的囊泡约占总囊泡数的57.88%~77.85%，数量为（2.09~3.86）×1012个。结论新型液压透析滤过法能高效、便捷地实现大样本尿液uevs的分离。健康成人分泌的24huevs个体间差异较小，是uevs相关研究较理想的标本来源。