登革2型病毒特异性抗原片段的筛选及验证

目的筛选、鉴定登革2型病毒特异性抗原，为进一步研究其生物学功能奠定基础，并利用纯化抗原建立检测登革2型病毒抗体的elisa方法。方法分别利用dnastar及antheprot软件对登革病毒1-4型、流行性乙型脑炎及黄热病毒m、e蛋白进行分析，分析登革2型病毒型特异性抗原表位，并参考genbank中的序列信息进行比对，分析其在不同登革2型病毒株中的保守性。然后选择预测得分值较高的表位，利用pet32a原核表达系统进行原核表达，westernblotting验证其免疫学反应特异性，特异性片段经亲和层析纯化后，包被elisa微孔板，并对elisa反应条件进行系统优化。结果经系统的生物信息学分析，初步预测获得登革2型病毒特异性抗原表位8个，并对其中得分值较高的6段进行了高效表达，经westernblotting分析，获得登革2型病毒特异性抗原片段1段。经纯化后作为检测用抗原，建立了检测登革2型病毒抗体的elisa方法。初步应用表明，所建立方法具备良好的特异性，可检测1~200倍稀释的患者血清，s/n比值均在10以上。结论获得登革2型病毒特异性抗原片段1段，并建立检测登革2型病毒抗体的elisa方法。