重组人甘露聚糖结合凝集素三肽链亚单位的制备及其活性分析

目的制备具有生物学活性的重组人甘露聚糖结合凝集素三肽链亚单位（trhmbl）。方法我们先前已构建了n端缺失的重组人甘露聚糖结合凝集素（rhmbl△n）基因的原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达rhmbl△n融合蛋白。本实验利用胶原蛋白的3条肽链依其自身性质而相互缠绕成三股螺旋、装配成三级结构的原理，首先以凝血酶酶切rhmbl融合蛋白，将获得的单链rhmbl蛋白在50mmol/lpbs（ph7.2）和ddh2o中交替反复透析使之自动装配成trhmbl，最后以配体结合试验和c4d沉淀试验对终产物trhmbl进行生物学活性分析。结果rhmbl融合蛋白经凝血酶酶切，获得相对分子质量约20000的rhmbl单链蛋白；将其反复透析后得到相对分子质量约50000的rhmbl三肽链亚单位trhmbl；活性分析表明，该mbl亚单位的配体结合活性比rhmbl△n肽链高，并获得了激活补体凝集素途径的活性，但这些活性比天然mbl低。结论成功获得了具有生物学活性的重组人mbl三肽链亚单位；这种三肽链组织形式不仅是mbl的结构亚单位，而且是其功能亚单位。