过氧化氢诱导支气管上皮细胞高迁移率族蛋白1主动释放

摘要：目的研究过氧化氢（h2o2）对正常人支气管上皮细胞（hbe）hmgb1表达、移位和释放的影响。方法四唑盐(mtt)法检测不同浓度h2o2对支气管上皮细胞活力的影响；蛋白免疫印迹方法分别检测h2o2刺激hbe胞核，胞浆以及细胞培养上清中hmgb1浓度。免疫荧光观察hbe的hmgb1的定位和h2o2刺激后对hbehmgb1的移位的影响。结果125μmmol/l刺激对hbe活力无影响，而250μmmol/l会导致细胞活力下降（与对照组组比较，p<0.05），但是不引起细胞死亡，400μmmol/l（与对照组比较，p=0.000）导致hbe死亡。在浓度依赖性实验，与对照组比较12.5、125、250μmmol/lh2o2刺激hbe24h后培养上清hmgb1水平显著增加；在时间依赖性实验中与对照组比较，125μmmol/lh2o2刺激hbe12、24h后细胞上清中的hmgb1显著升高（p<0.05）；12.5μmmol/lh2o2刺激hbe24h后，hbe胞浆蛋白明显增加，胞核蛋白减少。而免疫荧光检测示hmgb1高丰度分布正常hbe的细胞核内，少量分布于细胞浆，125μmmol/lh2o2刺激hbe12h，hmgb1明显从hbe胞核向胞浆转位；125μmmol/lh2o2刺激hbe24h后观察到hmgb1移位分布到胞膜上。结论h2o2可以显著诱导支气管上皮细胞hmgb1的表达、转位和释放，提示hmgb1可能参与了哮喘，copd等慢性炎症疾病气道的氧化应激过程。