“两步转化法”高效制备携带自杀基因的重组腺病毒载体

目的采用“两步转化法”高效制备含胞嘧啶脱氨酶(cd)自杀基因的腺病毒重组载体。方法将质粒padeasy-1线性化后转化于bj5183菌,制备adeasy-1细菌;自载体pbs-cd中切出cd基因,亚克隆至穿梭质粒padtrackcmv上,构建的padtrackcmv-cd线性化后转化adeasy-1细菌,抽提同源重组腺病毒质粒,pacⅰ酶切后转染293细胞,在293细胞中包装与扩增,利用gfp报告基因进行滴度测定。同时按“一步转化法”进行同样的重组腺病毒制备,比较二者的优劣性。结果“两步转化法”终产物17个克隆中13个正确,正确率为76.5%(13/17);“一步转化法”重组产物17个克隆中有2个正确,正确率为11.8%(2/17),两者具有显著性差异(p=0.00017)。结论“两步转化法”细菌内同源重组是一种更高效、更方便的重组腺病毒制备方法。