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OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用：99美元
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靶向性双自杀基因系统对脐静脉内皮细胞的杀伤作用
, PP. 139-143
Keywords: 肿瘤/治疗,基因治疗,自杀基因,kdr启动子,血管内皮细胞
Abstract:
目的研究腺病毒介导的前药/血管内皮生长因子受体(kdr)启动子-双自杀基因系统对血管内皮细胞的杀伤作用。方法应用pcr扩增出kdr启动子、cd基因、tk基因序列,构建pkdr-cdglytk质粒;以adeasy-1系统为载体,采用细菌内同源重组“两步转化法”构建携带kdr启动子调控下的cd与tk的融合基因腺病毒重组质粒padkdr-cdglytk,重组质粒在293细胞中包装成病毒,并进一步扩增、纯化,以不同的感染复数(moi)体外感染脐静脉血管内皮细胞(huvec),利用重组病毒携带的绿色荧光蛋白(gfp)基因,荧光显微镜下观察重组腺病毒的感染效率,并给予不同浓度的gcv(ganciclovir)和/或5-fc(5-fluorocytosine),比较gcv(ganciclovir)和/或5-fc联合对转基因huvec细胞的杀伤作用。结果成功构建了adkdr-cdglytk重组病毒,并高效地转染了huvec,其转染效率随重组病毒的moi增加而升高。被转染的huvec对gcv和5-fc高度敏感。另外,moi一定时,细胞存活率随gcv和5-fc浓度增加递减;gcv和5-fc浓度一定时,细胞存活率随moi升高而降低。不同前药组细胞存活率结果显示:联合应用gcv+5-fc较单用gcv或5-fc对感染细胞的杀伤作用更强(p<0.05)。结论kdr启动子-双自杀基因系统对脐静脉内皮细胞具有强烈的杀伤作用,其杀伤效率与gcv和5-fc的浓度及重组腺病毒的moi相关,联?
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