肺炎链球菌触发肺ⅱ型上皮细胞微丝肌动蛋白重排的钙信号转导机制

目的通过体外实验研究肺炎链球菌(s.pn)是否可通过肺型上皮细胞(a549)钙信号转导途径触发微丝肌动蛋白(f-actin)细胞骨架重排,进而导致s.pn对a549细胞的侵袭。方法采用f-actin特异性fitc-phalloidin荧光染料,观察s.pn作用a549细胞前后f-actin细胞骨架重排情况,以重排百分率表示;用f-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素d预处理a549细胞,观察s.pn对a549细胞的侵袭;使用ca2+信号转导抑制剂dantrolene预处理a549细胞,观察其与f-actin细胞骨架重排百分率间是否存在剂量依赖关系;用fura-2/am荧光探针负载a549细胞后测定s.pn粘附a549细胞30、60、90min的胞内[ca2+]i。结果s.pn作用a549细胞后,经fitc-phalloidin荧光染色,f-actin细胞骨架呈黄绿色块状聚集;f-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素d可明显降低s.pn对a549细胞的侵袭,在其浓度为0.25μg/ml时,未得到可测的细菌数;ca2+信号转导抑制剂可部分抑制a549细胞f-actin细胞骨架重排,且与f-actin细胞骨架重排百分率间存在量效关系;s.pn粘附a549细胞30、60、90min后的胞内[ca2+]i高于对照[(187.4±17.3nmol/l)],并达到饱和,分别为(487.5±38.1)、(548.2±35.6)和(557.2±47.5)nmol/l。结论s.pn可通过ca2+细胞信号转导途径触发a549细胞f-actin细胞骨架重排,进而导致s.pn侵袭a549细胞。