小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的表达、纯化与鉴定

目的构建小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mgm-csf)工程菌,通过摸索其变、复性和纯化条件,得到高纯度高比活的重组mgm-csf蛋白。方法以本实验室构建的hil-2/mgm-csf融合蛋白表达载体为模板,pcr扩增mgm-csf基因,克隆入pet-11c表达载体,转化bl21,构建bl21/pet-11c/mgm-csf工程菌,用本所专利方法提取包涵体,在含低浓度盐酸胍的复性液中复性,采用镍离子亲和层析纯化。结果工程菌采用th肉汤培养,32℃、0.1mmol/liptg双重诱导,表达量达菌体蛋白总量的60.6%。提取包涵体在含1.5mol/l盐酸胍的谷胱甘肽复性液中复性效果最好,比活达4.2×106u/mg。经过亲和层析一步纯化,目的蛋白纯度达95%,比活与标准品相当。结论构建了高效表达mgm-csf的工程菌,建立了其复性和纯化工艺,为进一步研究dc、gm-csf体内抗肿瘤功能奠定了基础,并可为il-2/gm-csf双功能分子的生物学功能研究提供对照。?