pep-1-egfp融合蛋白的表达和纯化及其转导入人脐静脉内皮细胞

目的表达并纯化融合蛋白pep-1-egfp以对其穿透细胞膜的能力进行研究。方法用分子克隆技术构建出表达型载体pet15b-pep-1-egfp,在大肠杆菌e.colibl21(de3)中表达融合蛋白pep-1-egfp并进行ni2+-树脂柱亲和层析纯化以进行融合蛋白穿透人脐静脉内皮细胞的实验。结果经测序证实成功构建了表达型载体pet15b-pep-1-egfp,pep-1-egfp融合蛋白在大肠杆菌bl21(de3)中得到高效表达,纯化后的蛋白浓度为6.18mg/ml,蛋白产量为14.15mg/100ml菌液,sds-page和westernblotting显示纯化蛋白为融合蛋白pep-1-egfp,细胞膜穿透实验证实pep-1-egfp融合蛋白能进入人脐静脉内皮细胞。结论pep-1-egfp融合蛋白的表达和纯化及其穿膜能力的研究为pep-1携带有生物活性的大分子物质进行蛋白治疗奠定了基础。?