人羊膜上皮细胞干细胞特性及向胰岛素分泌细胞分化的研究

摘要：目的建立人羊膜上皮细胞（haecs）的分离及培养方法，探讨其向胰岛素分泌细胞分化的能力。方法观察不同培养方法对haecs生长倍增时间的影响以优化其培养体系；通过细胞免疫荧光法检测不同培养代数细胞多能干细胞的表面标记；通过体外添加诱导因子的方法，探讨诱导haecs向胰岛素分泌细胞分化的潜能。结果在10ng表皮生长因子培养下，haecs可长期传代。haecs表达胚胎干细胞表面标记如阶段特异性胚胎抗原4等；采用悬浮培养法诱导分化，可检测到胰岛发育、胰岛功能基因如胰腺十二指肠同源盒、神经源素3、同源异形盒转录因子6、胰岛素、胰高糖素的表达，免疫组化检测细胞可以表达胰岛素，并且随着外界葡萄糖浓度升高，胰岛素分泌显著增加。结论建立了人羊膜上皮细胞的分离和培养方法（不添加动物血清）；在体外可诱导分化为胰岛素分泌细胞。