慢病毒介导rnai抑制大肠癌细胞april表达对化疗敏感性的影响

摘要：目的探讨慢病毒介导的rna干扰（rnainterference,rnai)沉默april基因对大肠癌细胞株lovo化疗敏感性的影响。方法实验分为3组：sirna-april组、非特异性序列组和空白对照组。制备sirna-april慢病毒表达载体，pcr筛选阳性克隆，测序鉴定。转染lovo细胞48h后，westernblot检测lovo细胞的april表达水平；同时用10μg/ml5-fu处理细胞，5-fu作用72h后，采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化，mtt法检测细胞增殖抑制率。结果pcr和测序证实，成功构建sirna-april慢病毒表达载体。westernblot检测表明sirna-april组的april表达水平下调。5-fu处理lovo细胞后，流式细胞仪检测各组的凋亡率分别为(21.12±3.35)%、(13.06±1.92)%和(12.28±1.79)%，sirna-april组显著高于另两组(p<0.01)，且g0/g1期细胞增多，g2/m期细胞减少（p<0.05）；mtt法检测显示各组的增殖抑制率分别为(59.67±5.03)%、(42.33±4.16)%、和(39.67±4.73)%，sirna-april组显著高于另两组(p<0.01)。结论以april为靶标的rna干扰能下调大肠癌细胞株lovo中的april表达，增强其对5-fu的化疗敏感性。