let-7d表达质粒的构建及其对卵巢癌细胞高迁移率a2蛋白及ras蛋白表达的抑制作用

目的构建let-7d真核表达载体，研究let-7d对卵巢癌细胞生物学行为及蛋白表达的影响。方法根据let-7d序列设计合成microrna片段，定向克隆到pcdnatm6.2gw/emgfpmir真核表达载体上，运用基因转染技术将其导入卵巢癌igrov1细胞中，使let-7d基因过表达，以实时荧光定量pcr验证let-7d及高迁移率a2（hmga2）基因的表达，并用westernblotting检测相关蛋白hmga2的差异表达。以mtt绘制细胞生长曲线，流式细胞术检测细胞凋亡率，分析let-7d对igrov1细胞增殖生长的影响。结果成功构建针对靶向let-7d的表达质粒，将表达质粒转染人卵巢癌igrov1细胞后，明显下调hmga2的表达水平，而下调ras蛋白的作用较弱，没有前者明显。细胞表型研究显示，抑制hmga2表达可能改变该细胞的恶性表型，表现在细胞增殖能力明显下降，自发凋亡率明显增加等。结论let-7d通过对hmga2的调控，在改变卵巢癌igrov1细胞恶性表型方面可能起重要作用。