3种腺相关病毒介导的绿色荧光蛋白对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率

摘要：目的比较3种不同血清型腺相关病毒（aav）介导的绿色荧光蛋白对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率。方法原代分离培养西藏小型猪胚胎成纤维细胞并进行形态学鉴定，按照感染复数（moi）为103、104、105转染传代两次的猪胚胎成纤维细胞，流式细胞学检测不同血清型aav对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率，并在倒置显微镜下观察转染后绿色荧光的表达强度；同时，应用mtt方法检测不同血清型aav对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的毒性。结果腺相关病毒aav2-egfp对pff的转染效率随moi值的增加而增高，moi为103、104、105时，转染效率分别为（33.68±1.18）%、（50.80±2.59）%和（60.08±1.08）%，而其他两种血清型病毒感染效率均低于aav2-egfp。3种病毒转染pff过程中，细胞生长正常，mtt显示各个转染组与对照组（未转染组）在d570处吸光度无显著差异。结论aav2血清型载体对体外培养的猪胚胎成纤维细胞的感染效率显著高于其他几种血清型，aav8和aav9对pff感染能力极差，筛选aav2作为西藏小型猪基因打靶的最适病毒载体；同时，3类血清型病毒载体对猪胚胎成纤维细胞均无明显细胞毒性。