人tau基因多表位肽段原核表达载体的构建与表达

摘要：目的构建含人tau多表位肽段基因的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达并纯化目的蛋白，检测tau多表位dna疫苗免疫小鼠后特异性抗体产生情况。方法以质粒pvax1-tau为模板，用pcr扩增人tau多表位肽段基因，插入表达载体pgex-4t-2中，构建原核表达质粒pgex-4t-2-taup1/p2。将鉴定后的阳性重组质粒转入e.colibl21（de3）中，经异丙基-β-d-硫代吡喃半乳糖苷（iptg）诱导表达，并采用gst法纯化、sds-page鉴定目的蛋白的表达。以taup1/p2dna疫苗免疫小鼠获取血清，dot-blot检测taup1/p2特异性抗体产生情况。结果pcr扩增出约300bp的基因片段，克隆至表达载体后，经酶切和测序验证正确；获得了纯化的目的蛋白，并证实了gst-taup1/p2融合蛋白的表达。dot-blot检测到特异性taup1/p2抗体的产生。结论成功构建和表达人tau多表位肽段基因的目的蛋白gst-taup1/p2，能够识别tau多表位dna疫苗免疫后小鼠产生的特异性taup1/p2抗体。