不同试剂转染rip140-sirna至库普弗细胞的效率及毒性比较

目的对比不同的转染试剂转染rip140-sirna至肝脏库普弗细胞的转染效率及它们对肝脏库普弗细胞的细胞毒性，从而寻找出最佳的肝脏库普弗细胞试剂转染方法和条件。方法以肝脏库普弗细胞为研究对象，以绿色荧光蛋白（gfp）标记的rip140-sirna为报告基因（reportergene），采用lipofectamine2000，罗氏试剂（x-tremegenesirnatransfectionreagent）及嘌呤霉素筛选的慢病毒（1.0×108tu/ml）作为转染试剂，荧光倒置显微镜下观察细胞转染效果，激光扫描共聚焦显微镜分析不同试剂转染后细胞rip140的表达，流式细胞术检测各组细胞凋亡，cck-8检测各组细胞增殖抑制情况。收集细胞并进行裂解，提取细胞rna与蛋白质，运用rt-rcr和westernblot实验法检测转染rip140-sirna后的基因及蛋白质表达情况。结果对于肝脏库普弗细胞而言，在转染效率方面：嘌呤霉素筛选的慢病毒转染效率最高，可达90%以上；罗氏试剂其次；lipofectamine2000效果最差。在试剂的细胞毒性方面：流式细胞术及cck-8检测结果显示罗氏试剂的细胞毒性最小，细胞可见其原有形态；慢病毒其次；lipofectamine2000细胞毒性最大，可见多数细胞失去原有形态，并存在细胞裂解状态。rt-rcr和westernblot实验显示慢病毒转染rip140-sirna的肝脏库普氏细胞组无论在基因方面还是在蛋白质水平均明显低表达于lipofectamine2000和罗氏试剂所转染的肝脏库普弗细胞组（p<0.05）。结论对于原代细胞肝脏库普弗细胞，在试剂转染方面，慢病毒转染方法可以达到理想的转染效率和较小的细胞毒性，且条件可控性与稳定性方面更加优越。