反义htert体外抑制白血病细胞增殖的研究

目的研究反义htert基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用。方法体外通过superfect将已构建好的正、反义htert真核表达载体转染hl60白血病细胞,再经过g418及pcr筛选鉴定分别转入了正、反义htert载体的抗性克隆细胞hl60-s和hl60-as。随后运用实时荧光定量rt-pcr技术及trap-银染法对各组细胞内源性htertmrna的表达情况及端粒酶的活性进行检测。同时还采用mtt法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义htert对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡。结果与空白对照、正义htert组相比,反义htert能显著地降低hl60细胞内源性htertmrna的表达(p<0.01)和下调端粒酶活性。当各组细胞传至第25代后,与hl60、hl60-s比较,hl60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加。结论反义htert在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调htert表达(端粒酶活性)而最终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的。