应用抗sjp38的单克隆抗体建立血吸虫感染的胶体金免疫层析检测体系

目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法.方法将已获得的单抗用protein-g亲和层析纯化,通过间接elisa测定每株单抗的亲和常数.按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(hrp)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合.胶体金标记株抗体,选择最佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、、5、6周的鼠血样进行检测.结果8株抗sjp38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10-8mol/l～2.82×10-10mol/l.根据配对实验,1a6与9h6、1a6与9g7、6g12与9h6、6g12与9g7以及9h6与9g7为最佳配对组合.标记1a6、6g12、9h6与9g7这株单抗后筛选出最佳反应模式,即以9g7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1a6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:时,检测效果最佳.对rsjp38的最低检测量为12.5ng/ml.抗检测感染3、、5、6周小鼠血清,阳性率分别为0%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性.结论通过抗体配对、最佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rsjp38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原sjp38.