|
OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用：99美元
|
|
|
|
体外拼装凋亡素基因
, PP. 195-197
Keywords: 基因拼装,凋亡素,聚合酶链式反应
Abstract:
目的以凋亡素基因为例,探讨用寡核苷酸片段体外拼装基因的方法。方法按已知的凋亡素基因序列(genebank登录号:ay171617),设计40bp的凋亡素基因寡核苷酸片段,并将其中的172位(bglii,agatct→agatcc)和306位碱基(hindiii,aagctt→aatcct)进行同义突变,taq消除这两个酶切位点。在pfu酶的pcr系统中,对寡核苷酸片段进行拼装和扩增。产物稀释后进一步纯化扩增,在tag酶存在的条件下对产物两末端加t,然后ta克隆于pgem-teasy载体中。阳性克隆经测序鉴定。结果凋亡素基因寡核苷酸片段第1次pcr拼装后,产物呈拖尾状。但产物经进一步稀释,并用两未端引物进行2次扩增后,即可见明确的产物带及其他梯形带状产物。目的产物ta克隆后,筛选得到阳性克隆,其经测序鉴定,与设计的凋亡素基因序列完全一致。结论体外基因拼装法是一种非常有效的基因克隆方法,可用于基因或载体的合成,及一次性对基因进行广泛的突变。
| [1] | 谷志远.现代医学分子生物学[m].北京:人民军医出版社,1998.177-217
|
| [2] | stemmerwpc,crammeria,hakd,etal.single-stepassemblyofageneandentireplasmidfromlargenumbersofoligodeoxyribonucleotides[j].gene,1995,164(1):49-53
|
| [3] | bameswm.pcramplificationofupto35-kbdnawithhighfidelityandhighyieldfromlambdabacteriophagetemplates[j].procnatlacadsciusa,1994,91(6):2216-20.
|
| [4] | guelenl,patersonh,gakenj,etal.tat-apoptinisefficientlydeliveredandinducesapoptosisincancercells[j].oncogene,2004,23(2):1153-65.
|
| [5] | 白杨,唱韶红,王继德,等.表达幽门螺杆菌粘附素baba重组蛋白菌株的构建及其粘附活性评价[j]第一军医大学学报,2003,23(4):293-5.baiy,changsh,wangjd,etal.constructionofthee.colicloneexpressingadhesinbabaofhelicobacterpyloriandevaluationoftheadherenceactivityofbaba[j].jfirstmilmeduniv/diyijunyidaxuexuebao,2003,23(4):293-5.
|
| [6] | 张彦明,李明,董文其,等.丙型肝炎病毒核心蛋白基因的克隆及其高效表达[j].第一军医大学学报,2003,23(10):1018-20.zhangym,lim,dongwq,etal.cloningardexpressionofhepatitisccoreproteingene[j].jfirstmilmeduniv/diyijunyidaxuexuebao,2003,23(10):1018-20.
|
| [7] | 温坤,梅亚波,丘立文,等.抗sars冠状病毒sl蛋白n端249至667的单克隆抗体的制备与鉴定[j].第一军医大学学报,2004,24(1):l-6.wenk,meiyb,qiulw,etal.preparationandcharacterizationofmonoclonalantibodiesagainsts1domainatn-terminalresidues249to667ofsars-associatedcoronaviruss1protein[j].jfirstmilmeduniv/diyijunyidaxuexuebao,2004,24(1):1-6.
|
| [8] | samalbb,arakawat,boonetc,etal.highlevelexpressionofhumanleukemiainhibitoryfactor(lif)fromasyntheticgeneinescherichiacoliandthephysicalandbiologicalcharacterizationoftheprotein[j].biochimbiophysacta,1995,1260(1):27-3.
|
| [9] | danen-vanoorschotam,fischerdf,grimbergenjm,etal.apoptininducesapoptosisinhumantransformedandmalignantcellsbutnotinnormalcells[j].procnatlacadsciusa,1997,94(11):5843-7.
|
| [10] | 朱惠明,蔡筱彦,黄勋,等凋亡素基因治疗系统对人肝癌细胞的影响[j].中华内科杂志(chinintermedj),2003,42(9):646-7.
|
Full-Text
|
|
Contact Us
service@oalib.com QQ:3279437679 
WhatsApp +8615387084133
|
|
