黄粉虫抗菌肽tenecin基因的克隆、原核表达及其抑菌活性

摘要：目的为研究黄粉虫体内抗菌肽表达调控的分子机制，克隆黄粉虫抗菌肽tenecin基因，并研究其原核表达产物的抑菌活性。方法用大肠杆菌dh-5α菌液（1×108/ml）腹部注射黄粉虫5龄幼虫，72h后提取其总rna，rt-pcr克隆tenecin基因，测序并进行生物信息学分析；构建原核表达重组载体pet-28a(+)-tenecin并转入大肠杆菌bl21菌株，用iptg诱导观察其表达情况；将4种不同浓度的原核表达产物tenecin蛋白作用于大肠杆菌dh-5α，测量抑菌圈直径大小，观察其抑菌作用。结果电泳及测序结果显示：tenecin基因的大小为255bp左右；用1mmol/liptg诱导后，经sds-page电泳检测在9000附近有目的条带，与理论值大小相符；体外抑菌试验表明：试验设3个重复，浓度为80、60、40、20μg/ml的tenecin蛋白与大肠杆菌dh-5α共培养18h后，抑菌圈直径（mm）分别为25.1±0.03、20.7±0.06、17.2±0.11、9.3±0.04。结论成功克隆黄粉虫抗菌肽tenecin基因，并成功表达tenecin蛋白，该蛋白对大肠杆菌dh-5α有明显抑制作用，为后期临床应用奠定基础。