小鼠生精相关基因pqe/dnajb13重组载体的构建和蛋白表达

目的利用分子克隆技术构建重组表达载体pqe/dnajb13，在大肠埃希菌中高效表达、鉴定并纯化。方法应用rt-pcr技术，以小鼠睾丸cdna文库为模板扩增dnajb13基因全长开放阅读框，将其连接到pqe载体后测序鉴定；将重组质粒转入宿主菌e.colim15，经iptg诱导表达his/dnajb13融合蛋白，ni2+亲和层析纯化融合蛋白，采用sds-page和westernblotting对融合蛋白进行分析和鉴定。结果成功构建了pqe/dnajb13重组质粒，测序结果与预期一致；转化重组质粒的e.colim15经iptg37℃诱导4h后高效表达his/dnajb13融合蛋白。结论成功进行了pqe/dnajb13重组质粒的构建和重组蛋白的表达，为dnajb13基因的功能研究奠定了基础。