tgf-β1诱导的肿瘤细胞csrnp1/axud1基因的表达及转录调节机制

目的探讨tgf-β1诱导的肿瘤细胞中csrnp1/axud1基因的表达及其调控机制。方法分别用不同浓度的tgf-β1或相同浓度下不同处理时间处理指数生长期的人肺腺癌细胞a549和人前列腺癌细胞pc-3，荧光定量rt-pcr检测tgf-β1对两种肿瘤细胞中半胱氨酸-丝氨酸蛋白（cystein-serine-richnuclearprotein,csrnp1）基因表达的剂量和时间依赖性效应；培养的a549细胞血清饥饿后，分别在有无tgf-β1（20ng/ml）和环己亚胺（30μg/ml）作用下处理24h，检测tgf-β1诱导的csrnp1基因的表达是否需要新蛋白的合成；最后，分别将smad3表达质粒flag-smad3和显性失活突变体表达质粒（flag-smad3-mu转染a549细胞中，并以空质粒pcdna3.1作为对照。血清饥饿后，进行有无tgf-β1（20ng/ml）处理24h，westernblot确定外源性smad3的过表达，荧光定量rt-pcr检测smad3的过表达对tgf-β1诱导的csrnp1基因表达的影响。结果tgf-β1以浓度和时间依赖的方式诱导肿瘤细胞中csrnp1基因的表达，并需要新的蛋白合成。smad3的过表达增加tgf-β1诱导的csrnp1的表达，而显性失活的smad3突变体（smad3-mu）的过表达则显著降低tgf-β1诱导的csrnp1的表达。结论肿瘤细胞中tgf-β1可能通过激活smad3及其下游信号通路而诱导csrnp1基因的表达。