nestin转基因小鼠模型的建立及nestin基因在器官中的表达

目的构建人nestin基因表达载体，制备nestin过表达转基因小鼠。方法以人神经胶质瘤细胞株u251的cdna为模板，分3段扩增出nestin基因cdna全序列，并将其克隆入含有强启动子rosa26的pbroad3载体，酶切鉴定、测序，除去原核序列，纯化。显微原核注射建立转基因小鼠。pcr验证nestin基因整合，确定建立首建者。将阳性鼠传代。westernblot方法检测f3代转基因小鼠与野生型小鼠主要器官（心、肺、脑、肾）的nestin表达。结果测序结果证明成功构建了受rosa26启动子调控的nestin转基因载体。出生34只小鼠，pcr检测证实存在首建者2只。westernblot方法证实，与野生型小鼠相比，f3代转基因小鼠脑、肺组织存在较高水平nestin表达。结论首次成功建立nestin过表达转基因小鼠，外源基因可遗传到子代并在脑和肺组织中稳定表达，为深入研究nestin在肿瘤转移、细胞“干性”的维持和细胞的分化等功能提供了良好的实验动物模型。