hsa-mir-186在结肠癌细胞中的表达及作用

目的检测hsa-mir-186在结肠癌组织及细胞中的表达，探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量pcr检测了mir-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况；扩增包含mir-186前体序列在内的基因片段，并将其克隆至plvthm载体，将plvthm-mir186质粒转染sw620细胞，流式分选慢病毒感染的sw620细胞；cck-8法、划痕实验和transwell检测细胞检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。westernblot检测靶基因yy1蛋白水平的表达。结果与癌组织相比，12例癌组织中mir-186的平均表达量为0.0024±0.0027，显著低于癌旁组织的0.066±0.068，p=0.008；mir-186在高转移潜能的人结肠癌细胞sw620和lovo相对表达量分别为0.118±0.138和0.157±0.001，与在低转移潜能ht-29细胞中表达量1.000±0.00，差异具有统计学意义p<0.05；质粒双酶切及测序鉴定plvthm-hsa-mir186重组质粒构建成功；荧光定量pcr表明稳定过表达mir-186的结肠癌细胞株sw620构建成功，且过表达mir-186后降低了细胞的增殖、迁移及侵袭能力，差异均具有统计学意义p<0.05。稳定过表达mir-186的细胞中，mir-186的表达明显高于对照组和未处理组，yy1蛋白质水平有所下降。结论hsa-mir-186在结肠癌组织以及在高转移潜能的人结肠癌细胞sw620、lovo中低表达，具有类似抑癌基因的作用；成功构建plvthm-mir186慢病毒重组质粒，并稳定转染结肠癌细胞sw620，抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力。mir-186调控yy1表达可能是抑制结直肠癌生物特性的重要机制之一。