mirna-30a/30e腺病毒表达载体的构建

目的构建稳定表达成熟mirna-30a和mirna-30e腺病毒表达载体。方法小鼠基因组中分别扩增出带有酶切位点的mmu-mir-30a、mmu-mir-30e目的基因，目的基因连接到穿梭质粒pses-hus，带有目的基因的穿梭质粒重组到骨架质粒adeasy1上，重组质粒转染到hek-293细胞中包装成腺病毒载体，反复扩增之后获得高滴度的pad-mmu-mir-30a、pad-mmumir-30e腺病毒。用目的腺病毒分3组（rfp对照组，mir-30a组，mir-30e组）感染小鼠mefs细胞，用荧光定量pcr方法检测mmu-mir-30a、mmu-mir-30e表达情况。结果分别扩增出带有酶切位点的357bpmmu-mir-30a，324bpmmu-mir-30e，并成功连接到pses-hus上，进一步与adeasy1重组，包装得到腺病毒表达载体，通过荧光定量pcr检测，mefs细胞中mmumir-30a升高26.46±7.46倍，mmu-mir-30e升高2.76±0.25倍。结论成功构建了成熟mirna的腺病毒表达载体。