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OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用：99美元
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pcdna4/hisc-mbl表达载体的构建及其在cho细胞中的表达
, PP. 859-863
Keywords: 甘露聚糖结合凝集素,表达载体,cho细胞
Abstract:
目的构建pcdna4/hisc-mbl表达载体,在哺乳细胞中表达人甘露聚糖结合凝集素(mbl)。方法应用pcr从含有中国人野生型mblcdna的质粒pgem-mbl中扩增目的基因片段,将其克隆至pcdna4/hisc真核表达载体。经酶切及测序鉴定后,以电穿孔法转染cho细胞,以rt-pcr分析其mrna表达,通过ni-nta琼脂糖柱层析纯化目的蛋白并以sds-page和western-blotting鉴定,以其为免疫原免疫小鼠后取鼠血清进行elisa检测分析目的蛋白的免疫活性。结果从pgem-mbl中扩增得到约750bp的cdna片段,构建成重组载体经酶切出现约5100和750bp片段,测序鉴定与预期的完全一致。rt-pcr证实转染细胞有mblmrna表达,纯化蛋白经sds-page电泳可见约29000、58000和87000条带,其中29000蛋白带可与6-his抗体反应。纯化蛋白免疫小鼠所获抗血清elisa效价是1:819200,与天然人mbl和重组mbl三聚体糖识别域反应的elisa效价均为1:25600。结论获得了表达中国人mbl的cho细胞株和重组人mbl,为mbl分子的进一步研究提供了条件。
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